共聚焦显微镜怎么准备细菌
共聚焦显微镜样品制备是检测前的关键步骤。样品需经荧光探剂标记(单标、双标、三标)。 标本可以是固定的或活的组织，也可以是固定的或活的贴壁培养，细胞应培养在Confocal专用小培养皿或盖玻片上，悬浮细胞，甩片或滴片后，用盖玻片封片。样品的Zda厚度约1~2mm，使用的盖玻片厚度应小于0.17mm，载玻片厚度应在0.8~1.2mm之间，而且表面光洁，厚度均匀，没有明显的干扰荧光。固定样品常用封片剂进行封片，常用PH8.5-9的PBS配制的甘油封片。 常规样品制备要求： 1、染料的选择 由于共聚焦显微镜是以单一波长的激光作为光源，因此在选择荧光染料时要根据共聚焦显微镜配备的激光器波长选择，如果在同一样品中有多种荧光染料标记，还要考虑它们的发射波长尽量不要重叠，避免串色问题。 2、样品承载物的选择 一般的共聚焦显微镜高倍物镜均为油镜，它的数值孔径较小，要求镜头与样品之间的工作距离不大于0.17mm，因此如果观察样品为贴壁细胞或组织切片，可以用普通的载玻片和盖玻片即可。如果是悬浮细胞或悬浮粒子，可以用共聚焦显微镜专用的培养皿承载样品进行观察。 3、封片剂的选择 如果样品只需要观测一次并且不是极易淬灭的荧光，可以选用一定浓度的甘油混合液封片即可。如果样品需要放置一段时间并多次拍摄，应选用抗荧光淬灭的封片剂，以减少荧光信号丢失。
激光扫描共聚焦显微镜技术的主要应用范围有哪些？
激光扫描聚焦扫描显微镜应用广泛，在生命科学、医学研究中日益受到重视。
● 原位鉴定细胞或组织里的生物大分子、观察细胞或亚细胞形态结构
原位检测核酸；
检测蛋白质、抗体及其他大分子；
检测细胞凋亡；
细胞器的观察和测定（线粒体、溶酶体、内质网和高尔基体）；
检测细胞融合；
观测细胞骨架；
检测细胞间隙连接通讯；
检测细胞或组织内脂肪；
进行细胞或组织结构的三维重构等
● 组织形态学观察
● 活体器官的生理、机理功能研究，如神经生物学、发育生物学
● 微生物、细菌、病毒的开态学观察和功能研究
● 交叉学课中的高分辨率成像，如药理研究、材料研究、化工原料等
