DNA提取试剂盒哪种好
1.
植物基因组DNA提取试剂盒
2.
细菌基因组DNA提取试剂盒
3.
动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒
4.
全血基因组DNA提取试剂盒(吸附柱法)
5.
酵母基因组DNA提取试剂盒
6.
真菌基因组DNA提取试剂盒
7.
土壤基因组DNA提取试剂盒
8.
通用基因组DNA提取试剂盒
9.
粪便基因组DNA提取试剂盒
采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取细菌基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,能够高效专一吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作,包括酶切、
PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
DNA提取试剂盒的操作方法
全套操作约需1小时,分匀浆、细胞裂解、除蛋白、DNA纯化等步骤,详细说明如下。匀浆和细胞裂解:使用不同的实验材料需采用不同的匀浆步骤,具体说明如下:【从动物组织中提取基因组DNA】使用研钵进行匀浆时:① 取1~100 mg的动物组织或人组织移入冰浴预冷的研钵中,快速用力展研成匀浆。注)下列组织请加液氮研磨至粉末状。A.富含DNA酶的胰脏、脾脏、胸腺、淋巴等组织。B.富含胶原蛋白的皮肤、肌腱等组织。C.富含角质蛋白的组织或坚硬的组织(如骨骼)等。② 加入650 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1,温和研磨30秒钟。注)使用上述①-注)的实验材料时,请在加入Solution A及RNase A1后,将研钵置于65℃水浴上研磨1分钟。③ 收集650 μl研磨好的组织匀浆液移至Collection Tube中。如果匀浆体积不足650 μl,请补充Solution A至650 μl,65℃保温5分钟。使用研磨棒进行匀浆时:① 取1~100 mg的动物组织或人组织移入冰浴预冷的Collection Tube 中,用研磨棒快速研磨成糊状。② 加入350 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1后用研磨棒快速研磨成匀浆。③ 加入350 μl的Solution A将研磨棒上的匀浆冲入Collection Tube中,充分振荡混合后,65℃保温5分钟。【从植物材料或植物培养细胞中提取基因组DNA】① 按下表称取适量的新鲜植物材料(如选用的是冷冻干燥植物材料,则用量减半),剪成小块放入研钵中,加入液氮,待样品冷冻完全后快速、用力研磨至粉末状。研磨时应间断加入液氮以防止材料融化。植物材料种类植物材料使用量*植物花、叶片10~100 mg植物茎60~240 mg植物根80~240 mg植物种子80~240 mg* 如选取植物的根、种子等样品时,因其基因组DNA含量很低,需使用超过表格中所示的参数用量,此时请分两管进行步骤1~6的实验操作,在步骤7的操作中再将各管溶液分次加入至同一Spin Column中过滤,使各管的基因组DNA结合到同一个Spin Column上。如从培养的植物细胞中提取基因组DNA,请离心收集2×103~1×107的培养植物细胞,加入150 μl水充分悬浮细胞后移入研钵中,加入液氮后快速、用力研磨至粉末状。注)样品研磨应充分,否则将会严重影响基因组DNA的收率。② 将研钵移至65℃水浴,当样品粉末刚开始融化时,向研钵中加入700 μl的Solution A和1.2 μl的RNase A1,用力碾磨30秒。③ 收集650 μl研磨好的组织匀浆移至Collection Tube中。如匀浆体积不足650 μl,请补充Solution A至650 μl。65℃保温15分钟。注)处理富含纤维的根/茎等植物材料或富含淀粉、蛋白质的种子等时,可延长水浴时间至60分钟。【从全血中提取基因组DNA】① 取10~250 μl的全血(含抗凝剂)加入至Collection Tube中。② 加入500 μl的Solution A。③ 加入1 μl的RNase A1,激烈振荡15秒钟后,冰浴5分钟。注) 人与动物的抗凝全血的一次处理量为≤250 μl;禽类、两栖类的抗凝全血的一次处理量为≤10 μl。【从培养细胞中提取基因组DNA】三.使用悬浮培养的动物细胞时:① 使用Collection Tube收集1×105~1.5×107的细胞悬浮液,5,000 rpm离心5分钟,弃上清(细胞培养液)。② 加入150 μl的灭菌蒸馏水或PBS悬浮细胞。③ 加入500 μl的Solution A和0.8 μl的RNase A1,激烈振荡15秒钟,然后室温静置1分钟。四.使用贴壁细胞时:① 弃尽培养液,向培养皿中加入650 μl的Solution A,室温静置1分钟。注)96孔板等的每个孔中一次容纳不了650 μl 溶液时,请分数次处理细胞。② 用移液枪的枪头吹落贴壁培养细胞,取650 μl的细胞悬浮液转移至Collection Tube中。③ 加入0.8 μl的RNase A1,激烈振荡15秒钟,然后室温静置1分钟。2. 加入400 μl的Solution B,振荡混合。3. 加入1 ml的4℃预冷的Solution C,充分混匀后,12,000 rpm离心2分钟。4. 弃去上层有机相,再加入1 ml的4℃预冷的Solution C,充分混匀后,12,000 rpm离心2分钟。5. 弃去上层有机相,然后将水相溶液(无色下层)转移至置于Collection Tube上的Filter Cup中,12,000 rpm离心1分钟。注)有机相(上层)带有颜色,请务必除尽,否则会阻碍DNA结合到DNA制备膜上。相间沉淀不必考虑,在过滤时将被去除。6. 弃Filter Cup,在滤液中加入400 μl的DB Buffer,混合均匀。7. 将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上。将上述操作6混合溶液转移至Spin Column中,12,000 rpm离心1分钟,弃滤液。8. 将500 μl的Rinse A加入至Spin Column中,12,000 rpm离心30秒钟,弃滤液。9. 将700 μl的Rinse B加入至Spin Column中,12,000 rpm离心30秒钟,弃滤液。注)请沿Spin Column管壁四周加入Rinse B,这样有助于完全冲洗沾附于管壁上的盐份。10. 重复操作步骤9。11. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上,在Spin Column膜的中央处加入50~200 μl的灭菌蒸馏水或Elution Buffer,室温静置1分钟。注)把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至65℃使用时有利于提高洗脱效率。12. 12, 000 rpm离心1分钟洗脱DNA。如果实验室备有适合于Spin Column接口的负压装置,可从上述操作步骤6完成以后进行以下操作。7. 将试剂盒中的Spin Column插到负压装置的插口上,将上述操作步骤6的混合溶液转移到Spin Column中,开启调节负压装置,缓慢吸走Spin Column中的溶液(流速控制在1滴/秒)。8. 将负压调至最大,向Spin Column中加入500 μl的Rinse A,吸尽Spin Column中溶液。9. 向Spin Column中加入700 μl的Rinse B,吸尽Spin Column中溶液。注)请沿Spin Column管壁四周加入Rinse B,这样有助于完全冲洗沾附于管壁上的盐份。10. 重复操作步骤9。然后从负压装置上取下Spin Column,将其安置于试剂盒中的Collection Tube上,12, 000 rpm离心1分钟。11. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上,在Spin Column膜的中央处加入50~200 μl的灭菌蒸馏水或Elution Buffer,室温静置1分钟。注)把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至65℃使用时有利于提高洗脱效率。12. 12, 000 rpm离心1分钟洗脱DNA。
全血基因组DNA提取试剂盒的作用原理是怎样的
全血基因组DNA提取试剂盒(离心柱型)作用原来具体是这样的:独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱.试剂盒特点:不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤.快速,简捷,单个样品操作一般可在20分钟内完成.多次柱漂洗确保高纯度,典型的产量200μl全血可提取出3-6μg,纯度达1.1.9,长度可达30Kb-50kb,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应.从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方,裂解快速完全,客户可根据需要选择购买.说明书中针对实验过程出现的疑难做出了详细的解答,帮助你解决实验过程中遇到的问题(如标本中含有血凝块、红细胞裂解不完全、DNA产量低、DNA下游酶切不能切开或者酶切不完全、DNA长度小于15kb、A260吸光值异常偏高、洗脱下来的DNA溶液还带有轻微的颜色等).
全血基因组DNA提取试剂盒的作用原理是怎样的
全血基因组DNA提取试剂盒作用原理:全血基因组DNA提取试剂盒特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取全血基因组DNA。 离心吸附柱中采用的硅基质材料为新型材料,能够高效、专一吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。全血基因组DNA提取试剂盒使用说明:使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。样品的处理(本产品适用于处理新鲜的或已经添加抗凝剂的0.lmL-1mL血液样品):a、在血液样品中加入2-3倍体积的红细胞裂解液,充分颠倒混匀,12000rpm离心1min,小心吸去上清,沉淀应为白色或淡红色,如果裂解不彻底,可重复以上述步骤一次。向沉淀中加200μL溶液YA,振荡至彻底混匀。b、 如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量为5-20μL,不需要再用红细胞裂解液处理,直接加200μL溶液YA,振荡至彻底混匀。向悬浮液中加入20μL 的RNase A (10mg/mL),充分颠倒混匀,室温放置10min。加入20μL的蛋白酶K( 10mg /mL ),充分颠倒混匀,65℃水浴消化30-60min,消化期间可颠倒离心管混匀数次,直至样品消化完全为止。加入200μL溶液YB,再加入200μL无水乙醇,充分颠倒混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响DNA的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,室温放置2min。12000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。向吸附柱中加入600μL漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。向吸附柱中加入600μL漂洗液,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。12000rpm离心2min,将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加50-200μL经65℃水浴预热的洗脱液,室温放置5min,12000rpm离心1min。离心所得洗脱液可再加入吸附柱中,12000rpm离心2min,即可得到高质量的基因组DNA。全血基因组DNA提取试剂盒注意事项:本试剂盒置于室温( 15 -25℃) 干燥条件下可保存12个月,更长时间的保存可置于2 -8℃。常用的血液抗凝剂有EDTA、ACD和肝素等,需注意的是,如欲制备大分子量血液基因组DNA,可优先考虑使用ACD抗凝。一般不使用肝素抗凝,因为用肝素抗凝的血液提取的基因组DNA进行PCR扩增时,有PCR扩增抑制现象。样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。4、如果试剂盒中的溶液出现沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响效果。绝大多数哺乳动物全血中的红细胞无核,故在提取基因组DNA时需去除不含DNA的无核红细胞,以免影响白细胞裂解和DNA释放。如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量减少为5-20μL,不需要再用红细胞裂解液来裂解红细胞。洗脱缓冲液的体积最好不少于50μL,体积过小会影响回收效率:洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响;若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围),pH 值低于7.0会降低洗脱效率。
全血基因组DNA提取试剂盒(离心柱型)的作用原理是怎样的
给你解释一下:博凌科为 全血基因组DNA提取试剂盒(离心柱型)作用原来具体是这样的:独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
试剂盒特点:
◆ 不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
◆ 快速,简捷,单个样品操作一般可在20分钟内完成。
◆ 多次柱漂洗确保高纯度,典型的产量200μl全血可提取出3-6μg,纯度达1.7~1.9,长度可达30Kb-50kb,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应。
◆ 从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方,裂解快速完全,客户可根据需要选择购买。
◆ 百泰克说明书中针对实验过程出现的疑难做出了详细的解答,帮助你解决实验过程中遇到的问题(如标本中含有血凝块、红细胞裂解不完全、DNA产量低、DNA下游酶切不能切开或者酶切不完全、DNA长度小于15kb、A260吸光值异常偏高、洗脱下来的DNA溶液还带有轻微的颜色等)。
DNA试剂盒都有哪些种类?哪种较好用?
作为何种用途啊,还有材料的种类呢?动植物方面差别很大,我个人只了解植物、细菌、藻类、土壤DNA的提取,植物总DNA的哪里的都差不多,价格0.5-2.5元每个样品,关键在研磨和酚类、多糖的去除(抽提),细菌核基因组DNA和土壤宏基因组冻融1.5*CTAB法足以,也没有太好的盒子。volume62提到的磁珠法绝对是非常好的方法,而且十分高效,适合高通量,就是贵啊,对样品的要求也较严格。
其实大多数DNA试剂盒都是基于CTAB或SDS法制作的,其优点一般是简单快速,外加药品的来源稳定(自己配药的话这方面可以考虑西格玛分装或者国药,其实真的国药的是很不错的,只是不好搞),再就是配方好了,毕竟试剂公司的研发部门也不是白饭的。