求助水稻的actin 内参基因引物
ACTIN在研究中被发现最不稳定 引物为：
Forward GAAGATCACTGCCTTGCTCC
Reverse CGATAACAGCTCCTCTTGGC
其他较好的水稻内参基因为：
18S rRNA
Forward ATGATAACTCGACGGATCGC
Reverse CTTGGATGTGGTAGCCGTTT
Glyceraldehyde-3-hosphate dehydrogenase
Forward GGGCTGCTAGCTTCAACATC
Reverse TTGATTGCAGCCTTGATCTG
Tubulin
Forward TACCGTGCCCTTACTGTTCC
Reverse CGGTGGAATGTCACAGACAC
出自一下文章：
《Normalization of reverse transcription quantitative-PCR with
housekeeping genes in rice》
你可以上网下载自己好好研究下
内参基因对于实时定量的结果非常重要 要慎重选择
台绣的台绣
即“台州刺绣”，已经演绎成为国内知名的女装服饰品牌（TGGC）。台州刺绣是中国民间刺绣的一种特创，是早期中西文化交融的一个见证，是国家非物质文化遗产之一。起源于清末海门的台绣，是浙江乃至全国抽纱刺绣门类中的大品种，因采用雕镂和刺绣相结合的制作工艺，故也称之为“雕平绣”。清光绪三十二年（1906年），法国仁爱会修女来椒江向天主堂孤儿传授台布、龙鳞档等刺绣工艺，用绸缎配上红绿色丝线绣成椅套、茶杯垫等供教堂内部使用，俗称“天主堂花”。这就是台州雕绣之先河。上世纪50年代初，台州绣衣出口东欧诸国，为国家换取了大量的外汇，有力地推动了浙江的外贸出口。60年代,“台绣”在针法与制作工艺上进行标准化管理，吸取萧山万缕丝花边之长，创制雕传统绣和万缕丝两大工艺相结合的新产品镶拼大套，在工艺上取得了一定程度的突破。至80年代，“台绣”的技艺日臻完美，以雕、包、绕、抽、拉、镶、拼等技法绣制而成的产品风格独特，特别是葡萄和玫瑰两个花卉图案栩栩如生、精美绝伦、誉冠全国同行，获国际友人的高度赞赏，“台锈”产业达到历史鼎盛时期。今天，《台州真丝雕平绣绣衣》已被列入浙江省传统工艺品重点保护项目，《台绣》文化也被列入台州非物质文化遗产保护项目，成为了国宝家珍。
碱基颠倒是基因突变吗？
1、碱基颠换(transversion)是指在碱基置换中嘌呤与嘧啶之间的替代，而转换(transition)则是一个嘌呤被另一个嘌呤，或者是一个嘧啶被另一个嘧啶替代。2、DNA分子中某一个碱基为另一种碱基置换，导致DNA碱基序列异常，是基因突变的一种类型。可分为转换和颠换两类。转换是同类碱基的置换（AT→GC及GC→AT），颠换是不同类碱基的置换（AT→TA或CG，GC→CG或TA）。3、碱基置换的后果可能是：①同义突变（silent mutation），位于密码子第三碱基的置换，由于遗传密码的简并，经转录和翻译所对应的氨基酸不变。②错义突变（missense mutation），碱基置换使密码子的意义改变，经转录和翻译所对应的氨基酸改变。③无义突变（nonsense mutation），碱基置换使密码子成为终止密码，导致肽链延长提前结束。④终止密码突变(terminator codon mutation)，碱基置换使终止密码转变成某种氨基酸密码，指导合成的肽链将延长到出现第二个终止密码才结束。引起碱基置换的致突变物称为碱基置换型致突变物（basesubstitutionmutation）。扩展资料：1、嘌呤有两个环（鸟嘌呤G、腺嘌呤A），嘧啶只有一个环（胸腺嘧啶T、胞嘧啶C），DNA碱基的替换保持环数不变，就是转换，如A→G、T→C；环数发生改变，就是颠换，如A→C、T→G。在进化过程中，转换发生的频率远比颠换高。2、碱基是指嘌呤和嘧啶的衍生物，是核酸、核苷、核苷酸的成分。DNA和RNA的主要碱基略有不同，其重要区别是:胸腺嘧啶是DNA的主要嘧啶碱，在RNA中极少见;相反，尿嘧啶是RNA的主要嘧啶碱，在DNA中则是稀有的。3、除主要碱基外，核酸中也有一些含量很少的稀有碱基。稀有碱基的结构多种多样，多半是主要碱基的甲基衍生物。tRNA往往含有较多的稀有碱基，有的tRNA含有的稀有碱基达到10%。嘌呤和嘧啶碱基是近乎平面的分子，相对难溶于水:在约260纳米的紫外光区有较强的吸收。
为什么两个基因的碱基序列完全相同，其基因的功能会存在不相同的情况？
亲亲虽然两个基因的碱基序列完全相同，但它们的功能可能存在不相同的情况，这是因为基因的表达和调控受到多种因素的影响，包括：1. 环境因素：环境对基因表达和调控起着重要作用。例如，温度、光照等环境变化可以影响基因表达水平。2. 组织和器官特异性：每个组织和器官都有其特定的生理和代谢需求，因此在不同组织和器官中，即使基因序列相同，也会发挥不同的功能。【摘要】
为什么两个基因的碱基序列完全相同，其基因的功能会存在不相同的情况？【提问】
亲亲虽然两个基因的碱基序列完全相同，但它们的功能可能存在不相同的情况，这是因为基因的表达和调控受到多种因素的影响，包括：1. 环境因素：环境对基因表达和调控起着重要作用。例如，温度、光照等环境变化可以影响基因表达水平。2. 组织和器官特异性：每个组织和器官都有其特定的生理和代谢需求，因此在不同组织和器官中，即使基因序列相同，也会发挥不同的功能。【回答】
3. 基因剪接：同一基因可通过不同的剪接方式产生多种不同的转录本，从而编码出具有不同功能的蛋白质。4. 后转录修饰：在RNA后转录过程中，还可能发生多种修饰作用，如剪切、修饰、降解等，这些修饰作用也会影响基因的功能。5. 表观遗传学：表观遗传学是指非DNA序列变化对基因表达和调控的影响。包括DNA甲基化、组蛋白修饰等，这些修饰可以影响染色体结构和基因的可及性，从而影响基因表达。【回答】
费费个人资料 费费个人简介
1、费沁雯（费费），1990年1月10日出生于安徽淮南，中国内地女主持人。2011年毕业于浙江传媒学院，后进入浙江广电集团工作。先后主持过《梦想新生活》、《冲关我最棒》、《爽食行天下》、《谁敢站出来》、《疯狂保龄球》、《幸运宝贝》等多档综艺节目。2008年，成为北京奥运会韩国代表队入场引导员。
2、早年经历：费沁雯从小就对艺术充满了热忱和喜爱，于是长大后选择了艺术这条道路，希望可以在自己的舞台上舞出华丽的艺术人生。
3、演艺经历：2006年，参加中国豆腐文化节“十佳形象使者”的比赛，夺取冠军与最佳上镜奖。
4、2008年，在邹城参与拍摄公益广告《鲜花传友谊》；同年，成为北京奥运会韩国代表队入场引导员。2009年，先后主持节目浙江卫视《越跳越美丽》、《我是大评委》 与安徽卫视《周日我最大》；同年成为CKA散打联赛总决赛散打宝贝，并为TGGC台绣拍摄写真。2010年，当选网易世界杯女主播；同年作为记者前往南非世界杯约翰内斯堡进行赛事播报，并参加浙江传媒学院传青新闻2011届文艺晚会。2012年，和朱丹一起主持节目《梦想新生活》。
蛋白的表达与纯化
pET，原核表达金标准（转）
pET 载体中，目标基因克隆到 T7 噬菌体强转录和翻译信号控制之下，并通过在宿主细胞提供 T7 RNA 聚合酶来诱导表达。 Novagen 的 pET 系统不断扩大，提供了用于表达的新技术和选择，目前共包括 36 种载体类型、 15 种不同宿主菌和设计用于有效检测和纯化目标蛋白的许多其它相关产品。
优点
· 是原核蛋白表达引用最多的系统
· 在任何大肠杆菌表达系统中，基础表达水平最低
· 真正的调节表达水平的“变阻器”控制
· 提供各种不同融合标签和表达系统配置
· 可溶性蛋白生产、二硫键形成、蛋白外运和多肽生产等专用载体和宿主菌
· 许多载体以 LIC 载体试剂盒提供，用于迅速定向克隆 PCR 产物
· 许多宿主菌株以感受态细胞形式提供，可立即用于转化
阳性 pFORCE TM 克隆系统具有高效克隆 PCR 产物、阳性选择重组体和高水平表达目标蛋白等特点。
pET 系统概述
pET 系统是在大肠杆菌中克隆和表达重组蛋白的最强大系统。根据最初由 Studier 等开发的 T7 启动子驱动系统， Novagen 的 pET 系统已用于表达成千上万种不同蛋白。
控制基础表达水平
pET 系统提供 6 种载体 - 宿主菌组合，能够调节基础表达水平以优化目标基因的表达。没有单一策略或条件适用于所有目标蛋白，所以进行优化选择是必要的。
宿主菌株
质粒在非表达宿主菌中构建完成后，通常转化到一个带有 T7 RNA 聚合酶基因的宿主菌（ λ DE3 溶原菌）中表达目标蛋白。在 λ DE3 溶原菌中， T7 RNA 聚合酶基因由 lacUV5 启动子控制。未诱导时便有一定程度转录，因此适合于表达其产物对宿主细胞生长无毒害作用的一些基因。而宿主菌带有 pLysS 和 pLyE 时调控会更严紧。 pLys 质粒编码 T7 溶菌酶，它是 T7 RNA 聚合酶的天然抑制物，因此可降低其在未诱导细胞中转录目标基因的能力。 pLysS 宿主菌产生低量 T7 溶菌酶，而 pLysE 宿主菌产生更多酶，因此是最严紧控制的 λ DE3 溶原菌。
有 11 种不同DE3 溶原化宿主菌。使用最广泛的为 BL21 及其衍生菌株，它的优点在于缺失 lon 和 ompT 蛋白酶。 B834 菌株为甲硫氨酸营养缺陷型，因此可用 35 S- 甲硫氨酸和硒代甲硫氨酸对目标蛋白进行高特异活性标记。 BLR 为 recA - 衍生菌株，改善了质粒单体产量，有助于稳定含有重复序列的目标质粒。两个硫氧还蛋白还原酶 ( trxB ) 突变菌株 (AD494,BL21 trxB ) ，有利于大肠杆菌胞浆中二硫键形成。 Origami TM 和 OrigamiB 菌株为 trxB/gor 双突变，这两个酶是主要还原途径的关键酶。 Origami 和 OrigamiB 宿主菌的主要优点是能形成正确折迭的含有二硫键的蛋白。新的 Rosetta TM 菌株补充了四种大肠杆菌稀有密码子的 tRNA ，改善了由于密码子使用频率不同而引起的一些真核蛋白低表达。其它菌株背景包括 K-12 菌株 HMS174 和 NovaBlue ，象 BLR 一样为 recA - 。这些菌株可稳定表达其产物可能导致 DE3 噬菌体丢失的某些目标基因。由于存在 F 附加体编码的高亲和力 lacIq 阻遏蛋白， NovaBlue 为一个有用的严紧型宿主菌。此外， Novagen 提供了 λ DE3 溶原化试剂盒，用于制备其它遗传背景的新表达宿主菌。表达高毒性基因或制备新的 λ DE3 溶原菌的另一替代方法是通过 l CE6 感染提供 T7 RNA 聚合酶。虽然不如用 IPTG 诱导 λ DE3 溶原菌方便，这种策略也被优先用于一些应用中。
高严紧性 T7 lac 启动子
除了在宿主菌水平选择三种基本的表达严紧性， pET 系统中 T7 启动子本身提供了两种不同的严紧性选择：普通 T7 启动子和 T7 lac 启动子。 T7 lac 启动子在启动子区下游 17bp 处含有一个 25bp 的 lac 操纵序列。该位点结合 lac 阻遏蛋白能够有效降低 T7 RNA 聚合酶的转录，这样提供了在 λ DE3 溶原菌中抑制基础表达的第二种基于 lacI 的机制（除了抑制 lacUV5 ）。含 T7 lac 启动子的 pET 质粒还具有它们自己的 lacI ，确保足够的阻遏蛋白结合到操纵基因位点上。
在实际应用中，为了获得最高产量的蛋白，通常应该测试多种不同的载体 / 宿主菌组合。
控制诱导的表达水平
在许多情况下，表达活性可溶性最好的蛋白依赖于宿主细胞的背景、培养条件和合适的载体配置。通常，目标蛋白活性最高的条件与产量最高的条件不一致。除了根据载体 / 宿主菌组合控制 T7 RNA 聚合酶的基础表达提供不同严紧性， pET 系统还根据诱导物（ IPTG ）浓度，对目标蛋白表达提供了真正的“变阻器”控制。 Tuner 和 OrigamiB 宿主菌的 lacY 突变使这种控制成为可能。
选择 pET 载体
所有的 pET 载体均来自 pBR322 ，但彼此间先导序列、表达信号、融合标签、相关限制性位点和其它特点有所不同。有两大类 pET 质粒，即转录载体和翻译载体：
转录载体（包括 pET-21 、 pET-23 和 pET-24 ）表达目标 RNA ，但不提供翻译信号。它们用于从自身带有细菌翻译信号的目标基因表达蛋白。（注意：转录载体通过命名后面的一个缺失字母后缀加以区分）
翻译载体含有设计用于蛋白表达的有效翻译起始信号。许多载体在读码框 a 、 b 和 c 中带有克隆位点，分别对应于 BamH I 位点的 GGA 、 GAT 和 ATC 三联体。
选择要点
选择用于表达的 pET 载体通常涉及多种因素。考虑以下三个主要因素：
· 所表达蛋白的用途
· 所表达蛋白的已知信息
· 克隆策略
pET 载体表达的蛋白用途各种各样。例如，表达量为分析级的蛋白可用于活性研究、突变体筛选和定性、筛选配体相互作用和抗原制备。大量活性蛋白用于结构研究、试剂或亲和基质制备。许多载体适合表达用于筛选或抗原制备的分析量蛋白，然而只有载体、宿主菌和培养条件组合十分适宜才可能用于大量纯化。如果需要活性蛋白连续高产，应该试验多种载体、宿主菌和培养条件组合以找到最优化结果。
任何关于目标蛋白的已知信息都有助于载体选择。例如，一些蛋白的活性要求一个或两个末端没有外源序列。许多 pET 载体能够克隆非融合序列，然而如果特定翻译起始序列不能在大肠杆菌中有效利用，表达水平可能受影响。在这些情况下，常可用有效表达的氨基末端序列构建融合蛋白，然后在纯化后用位点特异性蛋白酶消化去除融合序列。 LIC （连接非依赖的克隆）策略对这种方法特别有用，因为克隆操作通过肠激酶和因子 Xa 能够去除所有氨基端载体编码序列。
由于限制性位点和读码框相容性的需要，克隆策略也会影响载体选择。由于许多 pET 载体具有共同的限制性位点配置，通常可能将一次制备的目标基因克隆到几个载体中。采 PCR 克隆策略时则有不同的考虑。 LIC 载体试剂盒推荐用于此目的，可通过 PCR 制备插入片段，而不需要限制性消化载体或插入片段。
溶解性和细胞定位
考虑了目标蛋白的应用和克隆策略，还应该确定目标蛋白的细胞定位和溶解性，这一点十分重要。在许多实际应用中常希望表达可溶的活性蛋白。
特定目标蛋白的溶解性取决于多种因素，包括各自的蛋白序列。在许多情况下，溶解性不是有或无的现象，载体、宿主菌和培养条件可被用来增加或减少获得的可溶或不可溶形式的比例。 PET-32 载体系列使目标序列与通常能够增加可溶性蛋白比例的硫氧还蛋白 (Trx.Tag ) 融合。新推出的 pET-43.1 系列具有通过大量系统筛选而得到的一种过量表达时具有极高溶解性的大肠杆菌蛋白 --Nus.Tag 融合伴侣，从而进一步提高了目标蛋白的可溶性。此外， trxB 突变株 AD494 和 BL21 trxB ，或 trxB/gor OrigamiTM 和 OrigamiB 菌株可用于在胞浆中形成许多真核蛋白正确折迭和活性所要求的二硫键。低温诱导（ 15 -25 ° C ）也可增加可溶性目标蛋白的比例。
获得可溶性活性蛋白的另一策略是使蛋白外泌到胞外周质中，为折迭和二硫键形成有更适宜的环境。为了达到这一目的，通常使用带信号肽的载体。
一些纯化策略可以优化胞质中不溶性包涵体的产量。抽提包涵体并溶解，然后目标蛋白在体外重新折迭 ( 如使用 Novagen 的蛋白折迭试剂盒 ) 。该过程通常产生高产量初始蛋白并防止宿主细胞中的蛋白降解。然而，重新折迭成活性蛋白的效率随不同蛋白变化很大，可能相当低。 pET-31b （ + ）载体专为产生不可溶融合蛋白而设计，提供了生产小蛋白和多肽的有效方法。
满足不同需要的融合标签
如果融合序列不影响应用，生产带有 S.Tag 、 T7.Tag a 、 His.Tag a 和 HSV.Tag a 的融合蛋白会很方便后续操作，并易于通过蛋白杂交检测。这些多肽（融合序列很小），它们的检测试剂极特异和灵敏。通过使用相应树脂和缓冲液试剂盒， GST.Tag 、 S.Tag 和 T7.Tag 序列可用于亲和纯化。
使用 S.Tag 和 GST.Tag 分析试剂盒可对粗提或纯化的融合蛋白准确定量。采用一种新颖底物的 FRETWorks S.Tag 分析试剂盒可通过荧光检测到少于 1fmol 的融合蛋白。
His.Tag a 序列作为纯化蛋白的融合伴侣非常有用，尤其对那些以包涵体形式表达的蛋白来说，它可以使亲和纯化可在溶解蛋白的完全变性条件下进行。
CBD.Tag a 在低费用亲和纯化中非常有用。它们也特别适用于重新折迭（特别是带有 CBD clos .Tag a 序列的 pET-34b （ + ）和 35b （ + ））。因为只有正确重新折迭的 CBDs 结合到纤维素基质上， CBIND 亲和纯化步骤能够从制备物中去除不正确折迭的分子。任何标签可用于固定目标蛋白，但由于 CBD.Tag 序列的低非特异性结合以及与纤维素基质的生物相容性，使它更适合用于这一目的。
Nus.Tag 、 Trx.Tag 和 GST.Tag 序列用来增加其融合伴侣的溶解性。 Nus.Tag 和 Trx.Tag 载体与利于在胞浆中形成二硫键的 Origami 宿主菌相容。
各种融合标签和相应 pET 载体见列表。一些 pET 载体带有数个***的融合标签，作为 5' 融合伴侣。此外，许多载体通过目标基因序列符合读码框的通读而表达末端带有不同多肽标签的融合蛋白。使用在 5' 标签和目标序列之间含有蛋白酶切割位点（凝血酶、因子 Xa 和肠激酶）的载体，可以在纯化后选择性去除一个或多个标签。 pET-30 Ek/LIC 、 pET-32 Ek/LIC 、 pET-34 Ek/LIC 和 pET-36 Ek/LIC 是细胞定位和亲和标签配置良好的代表。 pET Ek/LIC 载体 Combo 试剂盒包括所有 4 种即用型载体，可直接用于构建数种目标基因构型。
pET NusA 融合系统 43.1
在大肠杆菌中生产可溶性活性蛋白
新推出的 pET NusA 融合系统设计用于克隆和高水平表达与 495aa NusA （ Nus.Tag ）蛋白融合的多肽序列。对数据库中 4000 个以上蛋白进行可溶性建模， NusA 蛋白被确认为具有最高的可溶性。在用四种不同 NusA 融合蛋白进行的试验中，大于 85% 的表达蛋白都是可溶的。 pET-43.1 载体含有 Nus.Tag 融合伴侣并与 trx/gor 突变体 Origami 和 OrigamiB 菌株相容，有利于在胞浆中形成二硫键。使用 pET-43.1 载体和这些 trx/gor 宿主菌组合可能获得二硫键结合的蛋白。
优点
· 高可溶性的 N- 末端 Nus.Tag 融合伴侣
· 上游 His.Tag a 、 S.Tag 和可选择的 C- 末端 HSV.Tag a 、 His.Tag 融合标签
· 凝血酶和肠激酶切割位点
· 多克隆位点位于所有读码框中
· 与 AD494 和 Origami 宿主菌株相容，可促进表达蛋白的正确折迭
pET 宿主菌株感受态细胞
所有 pET 系统宿主菌以预测试的感受态细胞形式提供，可立即用于转化。
（ DE3 ）指宿主为 λ DE3 溶原菌，其染色体上带有一拷贝由 lacUV5 启动子控制的 T7 RNA 聚合酶基因。这类菌株适用于从克隆到 pET 载体的目标基因生产蛋白。命名为 pLysS 和 pLysE 的宿主菌带有编码 T7 溶菌酶（为 T7 RNA 聚合酶的天然抑制物）的 pET 相容性质粒。带有 pLysS 的细胞产生少量溶菌酶，而 pLysE 宿主菌产生更大量酶。这些菌株用于在诱导前抑制 T7 RNA 聚合酶的基础表达，这样可以稳定编码影响细胞生长和活力的目标蛋白的 pET 重组体。带有 pLacI 的宿主菌产生额外的抑制 pETBlue 和 pTriEx 载体基础表达的 lac 阻遏蛋白。 λ DE3 溶原化试剂盒用于制备其它遗传背景的新表达宿主菌。
AD494 菌株为硫氧还蛋白还原酶 ( trxB ) 突变菌株，能够在胞浆内形成二硫键，提供了生产正确折迭的活性蛋白的潜力。 TrxB 突变可用卡那霉素选择，因此该菌株建议用于带氨苄抗性标记 bla 的质粒。
B834 为 BL21 的亲本菌株。这些蛋白酶缺陷宿主菌为甲硫氨酸营养缺陷型，可用 35 S- 甲硫氨酸和硒代甲硫氨酸对目标蛋白进行高特异活性标记，从而用于结晶学研究。
BL21 应用最广的宿主菌来源，具有 lon 和 ompT 蛋白酶缺陷的优点。
BL21 TrxB 菌株在蛋白酶缺陷 BL21 背景上具有与 AD494 菌株相同的硫氧还蛋白还原酶突变 ( trxB ) 。由于 trxB 宿主有利于胞浆内二硫键形成，它们的使用可增加正确折迭的蛋白组分。 TrxB 突变可用卡那霉素选择，因此该菌株建议用于带氨苄抗性标记 bla 的质粒。
BLR 为 BL21 的 recA - 衍生菌株，能够改善质粒单体产量，有助于稳定含有重复序列或其产物能够引起 DE3 噬菌体丢失的目标质粒。
HMS174 菌株在 K-12 背景上提供了 recA 突变。与 BLR 一样，这些菌株能够稳定其产物能够引起 DE3 噬菌体丢失的某些目标基因。
NovaBlue 适合 用作初始克隆宿主菌的 K-12 菌株，具有高转化效率、蓝 / 白斑筛选能力（与合适质粒）和导致优质质粒 DNA 高产的 recA endA 突变。由于存在 F 附加体编码的 lacI q 阻遏蛋白， NovaBlue 的 DE3 溶原菌是一个非常有用的严紧型宿主菌。
Origami 为 K-12 衍生的宿主菌，硫氧还蛋白还原酶突变 ( trxB ) 和谷胱甘肽还原酶 ( gor ) 基因均为突变，能够大大增强胞浆内二硫键的形成。研究表明即使总体表达水平相似， Origami （ DE3 ）表达的活性蛋白比其它宿主菌高 10 倍以上。 Origami 宿主菌与氨苄抗性质粒相容，可用于 pET-32 载体，硫氧还蛋白标签能够进一步增强在胞浆内形成二硫键。 TrxB 和 gor 突变可分别用卡那霉素和四环素选择，因此该菌株建议用于带氨苄抗性标记 bla 的 pET 质粒。
Origami B 宿主菌来源于 BL21 lacZY 突变株，还带有与原始 Origami 菌株相同的 TrxB / gor 突变。 Origami B 菌株集 BL21 、 Tuner 和 Origami 宿主菌的优点于一体。 TrxB 和 gor 突变可分别用卡那霉素和四环素选择，因此该菌株建议用于带氨苄抗性标记 bla 的 pET 质粒。
Rosetta 宿主菌从 BL21 衍生而来，可增强带有大肠杆菌稀有密码子的真核蛋白的表达。该菌株通过一个相容性氯霉素抗性质粒补充密码子 AUA 、 AGG 、 AGA 、 CUA 、 CCC 和 GGA 的 tRNAs 。这样 Rosetta 菌株提供了“万能”的翻译，从而避免因大肠杆菌密码子使用频率导致的表达限制。 tRNA 基因由它们的天然启动子驱动。在 Rosetta （ DE3 ） pLysS 和 Rosetta （ DE3 ） pLacI 中，稀有 tRNA 基因存在于分别带有 T7 溶菌酶和 lac 阻遏基因的同一质粒上。
Tuner 菌株为 BL21 的 lacZY 缺失突变株，能够调整培养物中所有细胞的蛋白表达水平。 lac 通透酶（ lacY ）突变使得 IPTG 均匀进入群体所有细胞，从而具有浓度依赖、水平均一的诱导表达。通过调整 IPTG 浓度，表达可从极低水平调节到极强、完全诱导的表达水平（通常与 pET 载体相关）。低水平表达有时可能增强难表达蛋白的溶解性和活性。 Tuner （ DE3 ） pLacI 菌株与 pETBlue 和 pTriEx 载体的表达相容。
重组蛋白的纯化
http://www.bioon.com/experiment/protein4/86143.shtml
国内有哪些生物技术公司可以做蛋白表达和纯化的服务？
这个问题问的过于笼统
首先，蛋白表达与纯化包括很多种类型，比如原核蛋白表达，哺乳动物蛋白表达，酵母蛋白表达以及昆虫蛋白表达等等，而现在生物实验中常说的蛋白表达纯化通常是指利用大肠杆菌表达系统的原核蛋白表达，这种表达方式比较简单，很多生物公司都可以做。但是如果是指很多种蛋白表达系统的话，可以做的公司就比较少了，如金斯瑞和德泰生物，他们就有比较完善的实验设备，可以满足多方面的实验需求。
另外，蛋白的表达成功与否还需要取决于蛋白的性质，找公司做的话建议先打电话进行咨询比较好。
简并引物 特异引物 还有16s的引物有什么不同 用它们PCR出来的产物 看条带能看出来吗
1、简并引物 ：序列未完全清楚的核酸的一种引物设计方案，比如TGGC(x)AAT,则设计引物时（X）位置可分别用ATCG四条引物
特异引物 ：这个不用说吧，就是序列清楚后自己根据上下要设计的普通引物
16s的引物：常被用于鉴定，一般引物可在文献、网站上找到。16S rRNA所对应的 16S rDNA基因在细菌基因组中具有高度保守性；对于同一种细菌其16S rDNA基因组的同源性应大于70 %。对16S rDNA而言，如果出现3个碱基以上的差异就可以断定细菌不属于同一种属；
2、PCR出来的产物看条带比较的是大小，16S rDNA挺多用的是150bp左右的，但简并引物和特异引物则看具体情况了，如果设计的引物区间差异大，是可以分开的
