ITS序列分析的应用原理和主要步骤有哪些
聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，为最常用的分子生物学技术之一。典型的PCR由（1）高温变性模板；（2）引物与模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是：将待扩增的模板DNA置高温下（通常为93℃-94℃）使其变性解成单链；人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新互补链。 PCR能快速特异扩增任何已知目的基因或DNA片段，并能轻易在皮克（pg）水平起始DNA混合物中的目的基因扩增达到纳克、微克、毫克级的特异性DNA片段。因此，PCR技术一经问世就被迅速而广泛地用于分子生物学的各个领域。它不仅可以用于基因的分离、克隆和核苷酸序列分析，还可以用于突变体和重组体的构建，基因表达调控的研究，基因多态性的分析，遗传病和传染病的诊断，肿瘤机制的探索，法医鉴定等诸多方面。通常，PCR在分子克隆和DNA分析中有着以下多种用途： (1) 生成双链DNA中的特异序列作为探针； (2) 由少量mRNA生成 cDNA文库； (3) 从cDNA中克隆某些基因； (4) 生成大量DNA以进行序列测定； (5) 突变的分析； (6) 染色体步移； (7) RAPD、AFLP、RFLP等DNA多态性分析等。
ITS序列分析的应用原理和主要步骤有哪些
我正好也在做这个诶~
原理：rDNA中18S、5.8S与26S的基因序列在真核生物中高度保守,而ITS承受的选择压力较小,相对进化速度较快,具有很高的可变性,且在核基因组中高度重复,这样可以根据保守序列中的变异位点设计特殊引物对ITS区进行PCR扩增。ITS区的可变性为物种鉴定提供了丰富的变异位点和信息位点,对ITS区进行PCR扩增、测序及序列分析后再设计特异引物,来诊断和检测植物病原菌以及植物类群等,已得到越来越广泛的应用。通过ITS序列的分析，还可以判断很多属、种之间的亲缘关系。
主要步骤：首先是提取基因组DNA，然后通过引物扩增ITS序列，对于效果好的进行测序，测得的序列在用软件进行分析
